細胞粘附檢測試劑盒（比色）

2-8℃ 避光

1. 試劑A為無菌溶液，注意防止污染。
2. 試劑B避免反復凍融。需要長期保存時可以根據使用情況進行小量分裝后-20℃保存。
3. 試劑拆封后請盡快使用完！

一年

酶標儀

動物貼壁細胞

1.方便：可用酶標儀檢測；
2.快速：最快1小時內即可完成實驗；
3.靈敏：數據可靠，重現性好，線性范圍更寬；
4.準確：試劑本身穩定性高，實驗結果穩定可靠。

酶標儀

1. 酶標儀
2. 離心機
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

1.PBS緩沖液
2.HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。
2. 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3. 染色培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間。培養時間一般為1- 4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μl 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μl 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入染色液B。
4. 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，會干擾O.D值讀數。
5. OD值在0.4-2.0之間均可，最大值控制在接近1.0左右為宜，小于0.4或大于2.0請調整接種量和培養時間。

包被：
1. 96孔板每孔加入50 μl -100 μl包被液。
2. 將培養板置2-8°C過夜。
3. 移除包被液。
4. 干燥培養器皿。室溫下置通風櫥內風干數分鐘即可完成干燥，至肉眼觀察干燥。
5. 用洗滌液洗滌1-3次。

細胞接種：
1. 待測定細胞處理好后，用胰酶消化，PBS洗滌，然后用相應培養基重懸，制成細胞懸液。
2. 按5×104-5×105細胞/孔接種96孔板，建議設3-5個復孔。
3. 放37℃培養箱孵育30分鐘-2小時。
4. 取出培養板，吸棄培養基。
5. 然后用相應的培養基洗滌2-3次。
6. 每孔加入100 μl新鮮培養基。

粘附率檢測：
1. 96孔板每孔加入10 μl細胞染色液B。
2. 在37℃孵育1-12 小時。
3. 測定樣品孔OD值。測定570 nm各孔的吸光值。
4. 細胞粘附率計算。
將各測試孔的OD值減去空白孔（未加細胞孔）OD值。各重復孔的OD值取平均數。
細胞粘附率% =（（待測細胞OD - 空白OD）/（對照細胞OD - 空白OD））×100

1. Guanghua Qin et al.
Hsa_circ_0032463 acts as the tumor promoter in osteosarcoma by regulating the miR?330?3p/PNN axis
International Journal of Molecular Medicine 2021

2. Jiong Lyu et al.
KLF7 is associated with poor prognosis and regulates migration and adhesion in tongue cancer
Oral diseases 2021

3. Huiqin Chen et al.
Repeated radon exposure induced lung injury and epithelial–mesenchymal transition through the PI3K/AKT/mTOR pathway in human bronchial epithelial cells and mice
Toxicology Letters 2020

4. Aihua Liu et al.
Down-regulation of NTSR3 inhibits growth, metastasis, and PI3K/AKT and MAPK signaling pathways in colorectal cancer cells
Biochemistry and Cell Biology 2020

5. Bo Tang et al.
Ionizing radiation induces epithelial mesenchymal transition in human bronchial epithelial cells
Bioscience Reports 2020

6. Bing Liu et al.
Protective effect of KLF15 on vascular endothelial dysfunction induced by TNF?α
Molecular Medicine Reports 2018